微生物检查的目的是查出感染性疾病的病原菌。对于取至特定感染部位且有明显生物学特征的微生物，可直接进行涂片，经染色后在显微镜下查找有无特定感染菌的存在，可快速用于诊断。而在许多情况下，需要对标本中可能的病原菌进行增菌培养或分离培养，以获得足够数量或分离纯化的病原菌。取一定浓度的病原菌用手工方法或自动化仪器进行分类鉴定和抗菌药物敏感实验，指导临床制定最佳的治疗方案。

　　由于微生物培养主要针对活体细胞，标本采集必须遵循合理选择感染灶、正确采集(无菌、多次重复、用药前)、采集后立即送检的原则。药敏结果应参照国际通用原则进行推断分析，并考虑体外实验可能受到的各种影响。

　　涂片

　　将可疑标本直接涂片后染色，根据显微镜检下所见报告结果。直接涂片可查到真菌及菌丝、淋球菌、结核菌、脑膜炎双球菌等。正常结果报告为未见或未查到。

　　通过抗酸染色在痰标本中查找结核菌是结核病诊治最为简便有效方法，根据中国防痨协会制定的《结核病诊断实验室检验规程》要求，对镜下未查到结核菌的标本报告为阴性，查到的需要按照所见到的数量分级报告为1+～4+。

　　在增菌培养后，也往往要进行涂片检查，以得到初步鉴定结果，以确定是否需要分离纯化或是否需要进一步的鉴定或药敏实验，如果需要进行鉴定和药敏实验，可根据显微镜下初步判断的菌群类别选择合适的鉴定和药敏实验组合。

　　普通培养

　　普通培养过程包括以下几个主要环节：增菌培养、初步鉴定、分离纯化。增菌培养一般需要24小时，如第一天培养后获得生长良好且单一纯生长菌落，则可直接进入鉴定及药敏实验。如果增菌后需分离纯化培养，则需第二天的纯化培养后才能进行鉴定和药敏实验。

　　要得到良好生长并能在短时间内用于鉴定和药敏实验的菌落，实验室接种操作固然重要，但正确留取标本最为根本，除遵循通用采集原则外，常见标本采集要点如下。

　　伤口分泌物及脓肿：闭锁性脓肿充分消毒后进行穿刺，用棉拭子或无菌玻璃管送检;开放性脓肿用无菌生理盐水冲洗后，擦去表层分泌物，取中层分泌物，用棉拭子送检。

　　痰：通常采用自然咳痰法，即晨起盐水漱口后第一口深部痰，痰量少者可雾化吸入加温45℃生理盐水。自然咳痰困难时，可采用插管。痰标本在低倍镜下观察，白细胞大于25，而上皮细胞小于10为合格标本，除此之外需要重新采集。

　　咽试子：晨起采集，取样部位应准确，力度合理，避免触及口腔、舌粘膜或唾液，扁挑体部位以小窝处为宜。采集后立即送检，防止标本干燥。

　　尿：清洗外阴后留取中段尿，必要时采取膀胱穿刺法或导尿管留取，有时还需采集肾孟尿。

　　胆汁：常用十二指肠引流法，为避免污染，采用胆囊穿刺法最理想。

　　穿刺液：脑脊液、胸水、腹水、心包积液、关节液、鞘膜液等应严格无菌操作。

　　血培养

　　血液中生长的细菌一般数量少，生长条件苛刻，需要特殊培养条件和较长的培养时间，同时需要采集两套(同时1个需氧瓶和1个厌氧瓶为一套)，最好是不同部位(如左臂和右臂)的血，以提高阳性率。因为临床常见病原菌许多为兼性厌氧菌，厌氧菌也常与需氧菌搀杂生长，最好同时采集需氧和厌氧瓶。采集厌氧培养标本时，一定要注意不要接触空气，以免培养失败。采集一次的菌血症检出率为55%，采集两次为90%，采集三次则为99%。一般要求连续采集3～4次，不能少于2次，且采血量不少于5mL(标准采集量为10mL)。

　　必须常规厌氧培养的情况包括：

　　■肠脓毒症、女性生殖道感染、褥疮及呼吸道感染。

　　■入住ICU或近期做过腹部外科手术。

　　■严重烧伤和外伤。

　　■伴有严重的心血管疾病、糖尿病、恶性肿瘤、移植和免疫抑制。

　　■新生儿、儿童及老年患者。

　　■其他有厌氧细菌感染高危因素或临床高度怀疑有厌氧细菌感染的情况。

　　本实验室采用bioMerieum公司BacT/ALERT  3D血培养仪进行血培养。当专用的培养瓶装入仪器后，仪器将自动孵育、震荡和检测，阳性结果将随时报警显示。在血培养瓶内底部装有特制的颜色感应膜，一旦微生物生长，其释放出的二氧化碳可使膜的颜色由深绿色变为黄色，仪器利用反射光度法每隔10分钟自动检测一次，当颜色变化达到仪器设置界限值后即报告阳性。

　　支原体培养

　　支原体为细胞壁缺失微生物，需用特殊培养基。泌尿生殖系发现的支原体有5种，其中解脲脲原体和人型支原体最常见，可以是正常菌群，也可引起感染。常见支原体引起的感染有尿道炎、输卵管炎、子宫内膜炎等。

　　采集支原体标本一般是泌尿道或生殖道分泌物，男性尿道应采用专用拭子，有时也采用晨尿。样品采集后应立即送检。

　　本实验室采用bioMerieum公司IST鉴定条，阳性结果除报告支原体计数、种名外，还可同时给出药敏结果。

　　真菌培养

　　真菌属于真核细胞型微生物，临床上最常见的是酵母菌和霉菌。与普通培养类似，很多标本都可以做真菌培养，但培养基会有不同。在进行真菌培养时，一般将标本接种于沙氏培养基上进行孵育，可见生长菌落后，再进行鉴定和药敏试验。

　　鉴定和药敏

　　培养后分离得到的微生物除已知敏感菌群外，均需要进行种群鉴定和抗菌素药物敏感实验。本室采用bioMerieum公司VITEK  2微生物分析系统进行鉴定和药敏实验，在6～24小时内可得到结果。该系统主要依据一系列的生化反应对临床常见细菌和部分真菌进行鉴定，并根据细菌在不同浓度抗菌素中的生长情况(浊度)来确定耐药情况，最终经系统内置的高级专家系统可对鉴定和药敏结果进行分析，提出符合临床实际的用药方案。

　　各种细菌对不同的抗菌药物的敏感性不同，即使同一细菌的不同菌株对同一抗菌药的敏感性也有差异。由于抗菌药物的广泛使用，耐药菌株也随之增加，因此，在临床使用抗菌素前进行药敏实验，根据药敏结果合理选用抗菌药物将使感染控制更加有效，也可减少耐药的发生。

　　药敏结果一般以定性方法和半定量两种方法报告。定性方法报告敏感、中介和耐药，较为直观，而半定量方法是以倍比稀释方法报告最低抑菌浓度(MIC，mg/L)，需要与给定范围比较后判断敏感、中介或耐药，对于敏感菌株，可依据所报告MIC值合理选择用药浓度。

　　■敏感(Susceptible，S)：表明该菌株所致感染可以用推荐用于此型感染及病原菌的抗菌药物剂量，进行恰当的治疗，除非存在禁忌症。

　　■中介(Intermediate，I)：表明该药物对该菌株的MIC接近于血液和组织中通常可达到的水平，但治疗的反应率可能低于敏感株。该分类意味着药物在生理浓集的部位具有临床效力或者可用高于正常剂量的药物进行治疗，但对于毒性范围窄的药物要慎重。

　　■耐药(Resistant，R)：表明常规剂量抗菌药物通常达到的全身浓度，不能抑制菌株的生长和/或MIC落在可存在某些特定的耐药机制并且治疗研究显示其临床疗效并不可靠的范围内。

　　进行细菌药敏实验时，对所有临床用药分别进行体外测试是不现实的，而是选择代表性药物，根据这些药物的体外测试结果进行临床用药的推断。这些推断方法是许多国际组织经过大量的临床研究后综合分析的结果，国内普遍认同美国临床和实验室标准化学会(CLSI)《抗微生物药物敏感性试验执行标准》推荐方法。CLSI  文件中美国FDA批准的常规试验和报告中应考虑的抗菌素推荐分组见本手册附录。常用药物推断方法如下。

　　1.葡萄球菌

　　青霉素敏感的菌株，用于葡萄球菌感染的其它青霉素类、头孢菌素类和碳青霉烯类也是敏感的。

　　青霉素耐药而苯唑西林(或头孢西丁)敏感的菌株对β-内酰胺酶不稳定的青霉素类是耐药的，但对其他β-内酰胺稳定的青霉素、β-内酰胺酶抑制剂复合药、相关的头孢类和碳青霉烯类是敏感的。

　　苯唑西林(或头孢西丁)耐药的葡萄球菌对现在可用的所有β-内酰胺类抗菌素是耐药的。

　　红霉素可诱导葡萄球菌对克林霉素产生耐药，在红霉素耐药时，不提倡使用克林霉素或参照D-试验结果用药。

　　2.肠球菌

　　对于肠球菌属，头孢菌素类、氨基糖苷类、克林霉素、复方新诺明，体外可能敏感，但临床治疗无效。对庆大霉素、链霉素等氨基糖苷类药物进行高浓度耐药性筛选，可确定是否可在临床联合用药。高浓度氨基糖苷类药物筛选阳性，表明青霉素类、万古霉素等不能同氨基糖苷类联合用药，阴性的粪肠球菌可联合用药，其它肠球菌需参考药代动力学结果确定是否联合用药。

　　青霉素敏感的不产β-内酰胺酶的肠球菌对氨苄西林、阿莫西林、酰基氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林以及哌拉西林/三唑巴坦敏感。严重的肠球菌感染，如心内膜炎，需要青霉素或氨苄西林加一种氨基糖苷类抗菌素的联合治疗。

　　亚胺培南在治疗粪肠球菌感染时，与氨苄西林相比并无优越性，因此，氨苄西林耐药时，即使亚胺培南敏感，也不提倡使用。

　　3.阴性杆菌

　　报告超广谱β-内酰胺酶(ESBL)，表明该菌株水解药物谱相当广泛，既使体外对部分药物敏感，在临床上对所有β-内酰胺类药物(包括青霉素类、头孢菌素类、氨曲南)也可能无效，对头霉素类、碳青霉烯类抗生素需依靠药敏结果来判断其耐药性。

　　肠杆菌属、柠檬酸杆菌属、沙雷菌属、变形杆菌属等虽然也可产生ESBL，但现有规则只针对肺炎克雷伯菌和大肠杆菌有效，其它菌属ESBL耐药情况需要临床进一步评价。

　　头孢噻吩结果可以代表头孢噻吩、头孢吡林、头孢拉定、头孢氨苄、头孢羟氨苄、头孢克洛。敏感能代表头孢唑林、头孢呋辛、头孢丙烯、头孢泊肟也敏感，但耐药不能代表头孢唑林、头孢呋辛、头孢丙烯、头孢泊肟也耐药。